发布日期：2020-06-24 15:37
病毒的包装是什么意思它的原理及经验
病毒的包装
慢病毒（Lentivirus）的包装是一种逆转录病毒，它可以将靶基因引入一些难以转染的细胞中，例如原代细胞等。 靶基因随机整合到宿主基因组中，大大提高了转染效率，可以在细胞系中稳定表达数代，可以筛选出稳定的转染细胞系。 由于随机积分，还存在不确定因素。 一些公司还可以提供靶向整合技术，将靶向基因整合到基因组的特定部分，以确保其病毒的包装的表达且不会因随机整合而对细胞造成伤害。
慢病毒表达载体包含包装，转染和稳定整合所需的遗传信息。 慢病毒包装质粒可以提供转录和包装RNA到重组假病毒载体中所需的所有辅助蛋白。 为了产生高滴度的病毒颗粒，有必要用表达载体和包装质粒将细胞共转染，将病毒包装在细胞中，将包装的假病毒颗粒分泌到细胞外培养基中，将上清液通过离心获得，然后可以直接用于宿主细胞感染。
慢病毒载体基因组是一种正链RNA。 基因组进入细胞后，通过自身的逆转录酶逆转录成细胞质中的DNA，形成DNA整合前复合体。 进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。 整合的DNA转录mRNA，并将其返回细胞质，表达目的蛋白或产生RNAi干扰。 慢病毒的包装系统由包装质粒混合物（Mix）和慢病毒载体质粒组成。
通过胰蛋白酶消化收集细胞，将细胞在35mm培养皿中用适当的完全培养基压平（根据实验需要选择培养皿，使细胞占据的面积附着在80％的培养皿上）。 培养皿的总面积％以上）。 将细胞在含有5％CO2的37°C培养箱中孵育8-24小时。 当细胞完全粘附于细胞后，即可开始转染。 转染前2h病毒的包装更换培养基（将旧培养基替换为1.5ml完全培养基）。
在我们的实验室中，我们包装了VSV-GPF病毒。 首先，将BHK21细胞分散在6孔板中。 达到90％的丰度后，将它们感染痘病毒，提供T7RNA聚合酶，然后用prVSV-GFP主链质粒转染。 表达4种结构蛋白的pBS-NpBS-P，pBS-G，pBS-L辅助质粒。 48小时后，收集上清液，再次感染健康细胞后可见GFP表达。 请诸神，辅助质粒的目的是什么？ 由于prVSV-GFP骨架质粒带有N，P，G和L的四个结构基因，因此尚不为人所知，但是如果没有辅助质粒则无法包装病毒。
有遗传物质有外壳蛋白，可以引导两者进入病毒。 腺病毒只能在293A中扩增，而不能在其他细胞中扩增。 慢病毒载体大多被HIV修饰，可以复制野生型慢病毒的包装载体，但只能在实验室中使用。 使其具有复制缺陷。 简而言之，它是替换或删除与相应功能有关的相应元素。
病毒在细胞中进行基因组复制和蛋白质表达，然后自行组装。 微观世界中的病毒颗粒很奇怪，并且具有不同的结构。 每种类型的病毒都有其自己的特殊组装方法。 然而，受科学技术水平的限制，病毒装配领域的研究工作相对不受欢迎。 如果要实时动态观察病毒组装，仍然很难实现。 因此，许多有关病毒的包装研究仍几乎是空白。 即使有研究，或者可以确定整个病毒组装过程，我个人认为可能只有5分之5。
分段病毒的包装，例如流感病毒，布尼亚病毒和虎肠病毒。 这些病毒的基因组是分段的。 如何确保在病毒包装过程中可以将每个基因组包装到病毒颗粒中。 以具有三段基因组的布尼亚病毒为例，如果只包装基因组的两个片段，会形成病毒颗粒吗？ 但是可以肯定的是，即使可以形成颗粒，病毒仍具有复制缺陷。
另一个有趣的现象是“空心包装”（我自己的名字）现象。 两天前，我读了一篇有关塞内卡病毒结构生物学的论文。 塞内卡病毒的包装属于小RNA病毒家族，很像口蹄疫病毒。 该论文的作者提到，他们发现细胞中10％的病毒不包含基因组，即所谓的病毒样颗粒（VLP），或者当包装病毒时，基因组没有被封闭，它们被 直接形成的。 完整的蛋白质外壳。 作者在文章中说，这个“空心包装”现在大象的机制尚不清楚。 让我用一个易于理解的词来概括它：尽管该病毒的包装看起来很严密有序，但有时还是会漏掉。
